Podzbiór neutrofilów w ludzkim ogólnoustrojowym zapaleniu hamuje odpowiedź komórek T poprzez Mac-1 ad 6

Trzy godziny po LPS zastosowano całkowite leukocyty, zawierające 85% neutrofili, 15% limfocytów i mniej niż 1% monocytów. Dodanie blokujących Mac-1 (3 blokujących (a M / CD11b) przeciwciał przeciwko całkowitym leukocytom zwiększyło proliferację limfocytów T po stymulacji PHA. To pokazało, że niezmanipulowane neutrofile były zdolne do hamowania proliferacji komórek T w sposób zależny od Mac-1 (3 (Suplementowa Figura 3). Zdrowe kontrole nie wykazały wzrostu proliferacji komórek T po dodaniu przeciwciał blokujących Mac-1 (3 (danych nie przedstawiono). Apoptoza neutrofilowa w tym teście była bardzo mała (dodatkowa figura 4); po 96 godzinach, 43%> 61% (<4%> 7%) komórek z aneksją ujemną było obecnych w różnych warunkach hodowli. Nie było istotnych różnic w przeżyciu między różnymi warunkami hodowli. Ten kompletny system modelowania leukocytów pozwolił nam ocenić występowanie indukowanej przez Mac-1 (3 supresji limfocytów T u pacjentów cierpiących na ostre ogólnoustrojowe zapalenie. Ciężko ranni pacjenci wykazali wystąpienie podobnego zestawu neutrofili CD62Ldim natychmiast po przyjęciu (<12 godzin) do naszego szpitala (Figura 7A). Pięciu pacjentów zostało poddanych próbom, a wszyscy pacjenci wykazali występowanie podzbioru neutrofili CD62Ldim. Obecność supresji indukowanej przez Mac-1 (3 wykazano przez wzrost liczby komórek i IFN-y. produkcja indukowana przez PHA po dodaniu blokującego przeciwciała 44a (Figura 7, B i C). Blokowanie CD11c jako kontroli nie indukuje zwiększenia proliferacji i IFN-y produkcja. Ryc. 7 Nasilenie proliferacji komórek T u ciężko rannych pacjentów. (A) Krew pobierano od ciężko rannych pacjentów natychmiast po przyjęciu do szpitala. Całkowite leukocyty wybarwiono dla CD16 i CD62L. Podzbiór CD62Ldim neutrofili był podobny do podzbioru znalezionego 3 godziny po LPS. Liczby wskazują wartości procentowe komórek w każdej bramce. (B) Całkowite leukocyty od ciężko rannych pacjentów stymulowano PHA (10 .g / ml) i inkubowano w obecności lub nieobecności (a) blokujących przeciwciała przeciwko Mac-1 (44a) lub CD11c (klon 3.9) przez 5 dni. Po 5 dniach inkubacji policzono całkowite leukocyty. Porównano grupy za pomocą testu t dla par sparowanych. Dane są przedstawione jako średnie. SEM z 4 niezależnych eksperymentów. (C) IFN-y stężenie mierzono za pomocą ELISA w supernatantach 5-dniowych hodowli. Dane są przedstawiane jako względny wzrost w porównaniu tylko do PHA. Porównano grupy za pomocą testu t dla par sparowanych. Dane są przedstawione jako średnie. SEM z 5 niezależnych eksperymentów. * P <0,05. Dyskusja W tym badaniu opisano identyfikację ludzkiego podzestawu neutrofili z odrębną funkcjonalnością. Dojrzały podzespół neutrofili uwolniony do krążenia podczas ostrego zapalenia hamuje aktywację komórek T. Ta supresja wymaga specyficznego dostarczania H2O2 do synapsy immunologicznej w sposób zależny od Mac-1 (3 (zależny od CDllb / CD18). Neutrofile są ogólnie uważane za homogenną populację. Tylko kilka badań dotyczy ich potencjalnej heterogenności, którą przypisuje się przede wszystkim uwalnianiu niedojrzałych krwinek obojętnochłonnych ze szpiku kostnego (20, 29). W zapaleniu ta heterogeniczność została opisana jedynie w kontekście ich ogólnie przyjętych funkcji przeciwdrobnoustrojowych (30, 31). Nasza praca jest pierwszą naszą wiedzą, aby pokazać wyraźny ludzki fenotyp neutrofili podczas ostrego zapalenia o zdolności immunosupresyjnej. Komórki te wykazują hipersegmentową morfologię jądrową, co implikuje wzrost dojrzałości w porównaniu z normalnymi neutrofilami krwi. Ponadto uważamy, że neutrofile w tym podzbiorze charakteryzują się unikalnym fenotypem (CD62Ldim / CD16bright / CD11bbright / CD54bright), który odróżnia je od klasycznie krótkotrwałych aktywowanych neutrofili (CD62Ldim / CD16bright / CD11bbright / CD54dim). Co ważne, nie mogliśmy indukować podobnego fenotypu supresyjnego typu Mac-1 (3 poprzez aktywację ex vivo normalnych neutrofili różnymi bodźcami prozapalnymi i przeciwzapalnymi (Suplementowa Figura 5). Po stymulacji za pomocą fMLF, LPS i IFN-y nastąpiło pewne zahamowanie proliferacji. plus TNF. Jednakże ta supresja nie była zależna od Mac-1, ponieważ blokujące przeciwciało 44a nie przeciwdziałało supresji. Najprawdopodobniej aktywacja neutrofili in vitro doprowadziła do pozakomórkowego pęknięcia oddechowego, powodując supresję limfocytów T. Stwierdzenie, że supresyjne neutrofile nie mogą być indukowane in vitro, skłania do spekulacji, że homeostatyczne neutrofile we krwi nie mają domniemanej funkcjonalnej instrukcji indukowanej w tkankach. [przypisy: skutki uboczne chemioterapii, sok z malin przepis babci, tabletki na przyrost masy ] [patrz też: sanostol tran, menostop, len mielony odtłuszczony ]