Patogenna Escherichia coli zwiększa Cl wydzielanie z nabłonka jelitowego przez zwiększenie ekspresji receptora galaniny-1 ad 6

Ilość mRNA Gal1-R określano 4 godziny później, punkt czasowy, w którym wykryto maksymalny wzrost po infekcji. CAPE hamował syntezę mRNA Gal1-R w sposób zależny od dawki (Figura 4a). Niestety, stężenia CAPE skuteczne przy zmniejszaniu syntezy mRNA Gal1-R również zmniejszały opory międzytrzonowe T84 (dane nie pokazane). Nawet przy najniższym badanym stężeniu CAPE, które zmniejszyło syntezę mRNA Gal1-R tylko o około 50%, opory przeznabłonkowe znacząco zmniejszyły się do poniżej 100. Cm2 (dane nie przedstawione). W związku z tym nie byliśmy w stanie wykorzystać tego swoistego inhibitora NF-kB w badaniu elektrofizjologii komórek T84. Figura 4 Wpływ inhibitorów NF-kB na syntezę mRNA Gal1-R i odpowiedź na galaninę po zakażeniu patogenną E. coli. (a) zależny od dawki wpływ specyficznego dla NF-kB inhibitora CAPE (25) na syntezę mRNA piku Gal1-R 4 godziny po 1-godzinnej ekspozycji na EHEC. Konfluentne komórki T84 eksponowano na wskazane stężenie CAPE przez godzinę, zakażono EHEC przez godzinę w ciągłej obecności CAPE i przemyto; RNA ekstrahowano 4 godziny później. (b) zależny od dawki wpływ deksametazonu na syntezę mRNA Gal1-R 4 godziny po 1-godzinnej ekspozycji na EHEC. Warunki były identyczne z tymi opisanymi dla a. (c) Wpływ deksametazonu na indukowany galaniną Isc po zakażeniu EHEC. Komórki T84 infekowano EHEC przez godzinę w obecności lub przy braku 200 nM deksametazonu, a odpowiedź Isc na (jM galaninę określono 24 godziny później. Dane reprezentują średnią. SEM dla co najmniej 3 oddzielnych eksperymentów. Następnie oceniliśmy deksametazon, powszechnie stosowany w leczeniu wielu różnych zaburzeń zapalnych wpływających na przewód pokarmowy, a ostatnio wykazano, że działa on jako inhibitor NF-kB (26. 28). Podobnie do komórek T84 preinkubowanych z CAPE, komórki T84 wystawione na rosnące stężenia deksametazonu przez godzinę przed zakażeniem EHEC wykazywały postępujący spadek ilości mRNA Gal1-R wykryty 4 godziny później (Figura 4b). Jednak w przeciwieństwie do CAPE, deksametazon nie zmienił oporności międzytrzonkowej komórek T84. Opory były 1,930. 50 cm2 na poziomie podstawowym i 2000. 100. Cm2 bezpośrednio po 1-godzinnej inkubacji z 200 nM deksametazonem, najniższe stężenie do całkowitego zahamowania indukowanego patogenem wzrostu mRNA Gal1-R. Podobnie, nie było różnicy między przeznabłonkową opornością 24 godziny po 1-godzinnym zakażeniu EHEC, niezależnie od tego, czy komórki były preinkubowane z deksametazonem. W szczególności opór wynosił 2100. 85. Cm2 w komórkach T84 24 godziny po zakażeniu EHEC, ale bez ekspozycji na deksametazon; to było 2040. 70. Cm2 24 godziny po zakażeniu EHEC i godzinę preinkubacji deksametazonu (n = 4 dla wszystkich warunków). Podobnie jak w przypadku CAPE, to stężenie deksametazonu znacząco osłabiało syntezę mRNA Gal1-R o ponad 90% (patrz Figura 4b) i całkowicie eliminowało wzrost EHEC indukowanego galaniną Isc (Figura 4c). Konkretnie, podstawowa Isc wzrosła z 2,1. 0,3 do indukowanej galaniny maksymalnie 8,4. 0,6 A / cm2 w komórkach kontrolnych i od 2,0. 0,5 do 23,5. 2,7 A / cm2 24 godziny po 1-godzinnym zakażeniu EHEC (Figura 4c). Preinkubacja z deksametazonem nie wpłynęła istotnie na indukowany przez galaninę wzrost wartości Isc w zakażonych komórkach T84. W pojedynczych warstwach komórek T84 preinkubowanych z 200 nM deksametazonu, ale nie poddanych ekspozycji na EHEC, indukowany galaniną Isc wzrósł z 1,6. 0,7 do 6,4. 0,9 A / cm2. Jednak deksametazon całkowicie hamował zdolność infekcji EHEC do wzmacniania indukowanego galaniną wzrostu Isc. Dwadzieścia cztery godziny po zakażeniu EHEC komórkami T84 z preinkubowaną deksametazonem, galanina zwiększyła Isc z 1,8. 0,4 do zaledwie 5,6. 0,3 A / cm2, wzrost podobny do obserwowanego w komórkach T84, które wcześniej nie były zakażone tym patogenem. Dane te potwierdzają naszą hipotezę, że patogeny jelitowe zwiększają ekspresję Gal1-R przez aktywację NF-kB. Charakteryzacja przeciwciała Gal1-R. Aby potwierdzić słuszność naszych obserwacji in vitro, oceniliśmy przeciwciało, które pozwoli nam zidentyfikować ekspresję Gal1-R u różnych gatunków. Najlepsze testowane przeciwciało skierowane jest na koniec COOH Gal1-R i jest oparte na projekcie Johna Walsha (patrz Metody). Początkowo ocenialiśmy seryjne rozcieńczenia tego przeciwciała zastosowane do trzustki myszy, ponieważ wcześniejsze badania wykazały, że wysepki, ale nie acini, specyficznie wyrażają receptory galaniny (19, 20). Przeciwciało Gal1-R w stężeniu 1: 500 było optymalne do oglądania wysepek (Figura 5), podczas gdy wyższe stężenia niespecyficznie zwiększały tło, a niższe stężenia zmniejszały intensywność, z jaką można było oglądać wysepki (dane nie pokazane)
[podobne: tabletki na erekcję bez recepty, przegladarka skierowan na leczenie, palomed ]
[więcej w: isoprinosine cena, nyda opinie, palomed ]