Obrazowanie PET makrofagów mózgu za pomocą obwodowego receptora benzodiazepinowego w modelu makaka neuroAIDS cd

Skany PET [11C] (R) -PK11195 otrzymane przed zakażeniem SIV pozwoliły każdemu zwierzęciu służyć jako jego własna kontrola ze względu na trudność zidentyfikowania spójnego regionu mózgu pozbawionego patologii choroby, służącego jako tkanka referencyjna. MRI. Obrazowanie wykonano za pomocą skanera MRI o przekątnej 3,0 Tesli (General Electric Medical Systems, Milwaukee, Wisconsin, USA) działającego w wersji VH3 oprogramowania skanującego. Skaner ma szczytową siłę gradientu 4 G / cm i szczytową prędkość zabijania 15 000 G / cm / s. Zaprojektowana na zamówienie, kwadraturowa cewka końcowa klatki (o średnicy 15 cm, 32 nogi) została wykorzystana do zeskanowania zwierząt leżących na stole obrazowym. Akwizycja danych została przeprowadzona przy użyciu protokołu obrazowania standardowych sekwencji obrazowania wykorzystywanych do oceny szczegółów anatomicznych, a następnie do uzyskania zestawu danych gradientowego echa o wysokiej rozdzielczości do zastosowania do rejestracji MRI PET i dynamicznego, wzmocnionego kontrastem echo-płaskiego akwizycja obrazu (EPI). Odzyskiwanie o wysokiej rozdzielczości, zepsute, z gradientem. Trójwymiarowe obrazy echa gradientowego uzyskano przed wstrzyknięciem kontrastu, aby dostarczyć zestaw danych o wysokiej rozdzielczości do rejestracji MRI-PET. Ten zepsuty zbiór danych przywoływanych gradientem uzyskano przy użyciu kombinacji czasu do echa, czasu do powtórzenia i kombinacji kątów odwrócenia (odpowiednio 7 ms, 25 ms i 40 °), tak aby zmaksymalizować kontrast między tkanką mózgową a jej otoczeniem (w tym oponami opon mózgowych). i płyn mózgowo-rdzeniowy [CSF]). Wzmocnione kontrastem echo gradientowe EPI. Multislice (21 wycinków osiowych, 3 mm grubości, bez przerw, 80 obrazów na plasterek), wywoływane gradientem, pojedyncze zdjęcia EPI (obrót = 60 °) zostały pobrane na minutę przed i minutę po podaniu żylnym w bolusie (3 ml roztworu soli fizjologicznej). roztwór z 0,1 mM / kg środka kontrastowego, sekundę) gadodiamidu (Omniscan, Nycomed Inc., Princeton, New Jersey, USA). Dane te uzyskano po zebraniu wszystkich innych zestawów danych rezonansu magnetycznego. Pomiary objętości zostały określone w sposób opisany wcześniej przy użyciu oprogramowania MORPH (40, 41). Autoradiografia. Autoradiografię przeprowadzono przy użyciu zamrożonych skrawków o grubości 15 .m, uzyskanych z kory czołowej (29). Skrawki mózgu umieszczono na szkiełkach Superfrost (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) i inkubowano w lodowatym 50 mM Tris-HCl (pH 7,4) zawierającym nM [3H] (R) -PK11195 (aktywność specyficzna 89,9 Ci / mmol, NEN Life Sciences Products Inc., Boston, Massachusetts, USA) przez 30 minut. Swoistość wiązania zapewniono przez włączenie 10 .M PK11195 (Sigma-Aldrich) w równoległych sekcjach. Skrawki zostały zamontowane z warstwą autoradiograficznej emulsji LM-1 (Amersham International, Amersham, Wielka Brytania) za pomocą pętli drucianej; następnie opracowano je po 4 tygodniach i zobrazowano na mikroskopie konfokalnym. Filtracja testów wiązania radioliganda. Tkankę mózgu z różnych regionów wycięto, zważono i homogenizowano w lodowatym 50 mM buforze Tris-HCl (pH 7,4). Homogenaty przemyto czterokrotnie przez odwirowanie przy 40 000 g przez 20 minut w 4 ° C. Całkowite wiązanie (na miligram tkanki) określono przez inkubację tkanki (całkowite stężenie białka w zakresie od 150 do 200 .g, określone przy użyciu zestawu do oznaczania białka BCA, Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, USA) z nM [3H] (R) -PK11195, z wyjątkiem eksperymentów wiązania nasycenia, w których zastosowano 0,5-80 nM [3H] (R) -PK11195, w 4 ° C przez 2 godziny w końcowej objętości 250 ul Tris-HCl. Niespecyficzne wiązanie określono przez włączenie 10 .M PK11195. Specyficzne wiązanie (w femtomolach na miligram białka inkubowanego w każdej probówce testowej) określono jako różnicę pomiędzy wiązaniem całkowitym i niespecyficznym (29). Reakcję zakończono przez dodanie lodowatego buforu w komorze próżniowej (Brandel Inc., Gaithersburg, Maryland, USA). Wszystkie próbki przeprowadzono w dwóch powtórzeniach. Oznaczanie immunohistochemiczne i kwantyfikacja w mikroskopie konfokalnym. Immunoznaczanie i mikroskopowe pomiary ilościowe w mikroskopie konfokalnym przeprowadzono zgodnie z wcześniejszym opisem (42, 43). Skrawki wybarwiono za pomocą Ab. S do glial fibrylarnego kwaśnego białka (GFAP, mysie mAb, DAKO Corp., Carpinteria, California, USA), lub CD68 (mysie mAb, DAKO Corp.) lub SIV gp110 (prezent od Kelly Stephano- Cole i Ronald Montelaro, Wydział Genetyki Molekularnej i Biochemii, University of Pittsburgh School of Medicine, Pittsburgh, Pennsylvania, USA) lub białko-2 związane z mikrotubulami (MAP-2) (SMI 52; Sternberger Monoclonals Inc., Lutherville, Maryland , USA) stosowane w stężeniach 1: 500, 1: 100, 1: 100 i 1: 1000, odpowiednio. Skrawki następnie inkubowano ze skoniugowaną z cyjaniną sprzężoną z 5j5 (sprzężonym z Cy5) kozim anty-mysim lub skoniugowanym z Cy3 anty-króliczym IgG w stężeniu 1: 200 (Jackson Immunoresearch Laboratories Inc., West Grove, Pennsylvania, USA)
[hasła pokrewne: taniec użytkowy kroki, palomed, badanie elektrofizjologiczne ]
[hasła pokrewne: nyda opinie, palomed, zofia zborowska wikipedia ]