Obrazowanie PET makrofagów mózgu za pomocą obwodowego receptora benzodiazepinowego w modelu makaka neuroAIDS ad 6

Nie zaobserwowano znaczącej różnicy w móżdżku (CB) i korze potylicznej (OC). Dane analizowano przy użyciu jednostronnej ANOVA. * P <0,004, ** P <0,0002. (B) Doświadczenia wiązania [3H] (R) -PK11195 (0,5-80 nM) wiązania nasycenia wskazują, że wzrost wiązania specyficznego jest spowodowany wzrostem całkowitej liczby miejsc wiążących [3H] (R) -PK11195 (3 (Bmax, femtomole). na miligram białka, oś y) w SIVE (n = 3, czarne słupki) w porównaniu z niezakażonymi kontrolami (Con; n = 2, białe słupki) i zakażonymi SIV, nonencefalitycznymi (SIV; n = 3, kreskowane kreski) przednie kora mózgowa. Dane analizowano przy użyciu jednostronnej ANOVA. ** P = 0,009. (C) Doświadczenia wiązania nasycenia wskazują na brak znaczącego wzrostu powinowactwa wiązania [3H] (R) -PK111953 (Kd, nM, oś y) w SIVE (n = 3, czarne słupki) w porównaniu z nieinfekowanymi kontrolami (Con; n = 2, białe słupki) i czołową korową tkankę mózgową zainfekowaną SIV, nie-zonadalcową (SIV; n = 3, kreskowane kreski). Dane analizowano przy użyciu jednostronnej ANOVA. P = 0,488. Figura 4 Specyficzne wiązanie [3H] (R) -PK111958a w SIVE odpowiada aktywowanym makrofagom, ale nie astrocytom. (A i B) autoradiogramy (3H) (R) -PK11195 (czarne ziarenka) z kontrastem lekkim hematoksyliną w odcinkach z kory czołowej wykazują wyższe specyficzne wiązanie w SIVE (A) w porównaniu z makakami niefunkcjonalnymi zakażonymi SIV (B). Strzałka w A pokazuje obszar licznych ziaren nadkrytych guzkiem mikrogleju. (C i D) Połączenie autoradiografii [3H] (R) -PK11195 (zielone ziarna) i barwienia immunologicznego dla aktywowanych makrofagów (C) (CD68, czerwony) lub astrocytów (D) (GFAP, czerwony) w korze czołowej SIVE. Specyficzne wiązanie [3H] (R) -PK111958 nakłada się na barwienie immunologiczne CD68 (C), a nie GFAP (D). Groty strzałek w C otaczają guzek mikrogleju. (D) Linia przerywana pokazująca światło naczynia krwionośnego i strzałka pokazująca astrocytowe procesy końcowe (czerwone). Statki w SIVE są często otoczone przez nacieki jednojądrzaste powiązane między procesami astrocytów w regionach z obfitymi ziarnami [3H] (R) -PK11195 w zieleni. Pasek skali w mikronach. Zwiększone wiązanie PK11195 u makaków SIVE może być spowodowane wzrostem ekspresji PBR (maksymalna związana odpowiedź na ligand [Bmax] na miejsca wiązania) lub z powodu zmian powinowactwa receptora-PK11195 (Kd). Zastosowaliśmy eksperymenty wiązania nasycenia [3H] (R) -PK11195 (zakres 0,5 80 80 nM), aby porównać całkowitą liczbę miejsc wiązania (Bmax) i powinowactwo ligandów (Kd) w SIVE z zakażonymi SIV, nonencefalitycznymi i nieinfekowanymi kontrolami. . Makaki SIVE wykazały znaczny wzrost miejsc wiązania [3H] (R) -PK111958 (Bmax, Figura 3B) (P = 0,009) bez znaczącej różnicy w powinowactwie ligandu (Kd, Figura 3C) (P = 0,488). Wiązanie [3H] (R) -PK11195 w tkance mózgowej SIVE lokalizuje się w makrofagach. PBR ulega ekspresji głównie na astrocytach i makrofagach mózgu (27, 44) oraz na niższych poziomach w neuronach (45). Chcieliśmy określić względny udział tych typów komórek w wiązaniu [3H] (R) -PK11195. Odpowiedzieliśmy na to pytanie na dwa sposoby. Najpierw połączono immunobarwienie dla astrocytów (GFAP) i aktywowanych makrofagów z autoradiografią [3H] (R) -PK11195 na zamrożonych skrawkach mózgu uzyskanych z kory czołowej makaków SIVE. (Jako marker lizosomalny makrofagów, CD68 ulega zwiększeniu po aktywacji i jest użyteczny do znakowania aktywowanych makrofagów / mikrogleju.) Wiązanie [3H] (R) -PK11195 w obszarach przykrytych SIVE, bogatych w aktywowane makrofagi i grudki mikrogleju (agregaty makrofagów) (rysunek 4C). Wiązanie [3H] (R) -PK11195 nie zachodzi na astrocyty znakowane GFAP w mózgowej tkance mózgowej (Figura 4D). Po drugie, przetestowaliśmy, czy wiązanie [3H] (R) -PK11195 w zhomogenizowanej tkance mózgowej jest skorelowane z obfitością astrocytów lub aktywowanych makrofagów lub neuronów. Astrocyty, aktywowane makrofagi i elementy neuronalne wybarwiono immunologicznie odpowiednio dla GFAP, CD68 i MAP-2 i oznaczono ilościowo w zainfekowanej SIVE i SIV, bezencefalicznej tkance mózgowej przy użyciu laserowej mikroskopii konfokalnej prowadzonej przez osobnika zaślepionego do eksperymentalnego projektu. Każdy marker typu komórki następnie korelowano z wartościami wiążącymi [3H] (R) -PK11195 uzyskanymi z odpowiednich regionów mózgu u tych samych makaków. Wyniki korelacji są reprezentowane przez współczynnik korelacji Spearmen a r (Tabela 3). Wiązanie [3H] (R) -PK11195 korelowało z liczebnością aktywowanych makrofagów CD68 barwionych za pomocą CD68 (r = 0,5285; P = 0,0066), ale nie z obfitością astrocytów barwionych GFAP (r = 0,1991, P = 0,2915) lub z obfitość barwionych MAP-2a elementów neuronowych (r = 0,0709; P = 0,6767) (tabela 3). Tabela 3 Wiązanie [3H] (R) -PK11195 w tkance pośmiertnej i wiązanie [11C] (R) -PK11195 in vivo korelują z barwieniem immunologicznym aktywowanych makrofagów, ale nie wiążą się z astrocytami lub neuronami [11C] (R) -PK11195 w SIVE in vivo koreluje z obecnością aktywowanych makrofagów
[patrz też: badanie elektrofizjologiczne, taniec użytkowy kroki, proste kroki taneczne ]
[więcej w: ile kalorii ma chleb orkiszowy, seronil ulotka, jak długo gotować ciecierzycę ]