Mechanizm naprowadzania dla rekrutacji komórek progenitorowych szpiku kostnego do nowonaczyń cd

Badania te wskazują, że komórki progenitorowe pochodzące ze szpiku kostnego wracają do wybiórczego układu naczyń obwodowych i przenoszą się do tkanki nowotworowej, co sugeruje, że specyficzne mechanizmy przywiązania i migracji komórek mogą odgrywać rolę w tej reakcji naprowadzania. Aby ustalić, czy CD34. krążące komórki (takie jak monocyty) również zatrzymują się w obwodowym unaczynieniu guzów, CD34. jednojądrzaste komórki izolowane z krwi obwodowej znakowano czerwonym fluorescencyjnym barwnikiem śledzącym komórki i wstrzykiwano je do krążenia myszy wszczepionych sferoidami raka piersi GFP + N202. Fluorescencyjne komórki zaobserwowano najpierw w walcowaniu, a następnie zatrzymywano w naczyniach krwionośnych na obrzeżach guza (Figura 2A), ale nie w środku guza (Figura 2A), sąsiadującej poduszce tłuszczowej piersi (Figura 2A) lub niezajętej skórze (nie pokazano). W ciągu 15-20 minut po iniekcji nie zaobserwowano dalszych komórek fluorescencyjnych zatrzymujących się w naczyniach krwionośnych. Zatrzymane komórki pozostały na obrzeżu guza podczas 30-minutowego początkowego okresu obserwacji i do 3 dni później (Figura 2A). Znacznie większa liczba komórek zatrzymanych w obwodzie guza niż gdzie indziej (Figura 2B). Analiza pośmiertna tkanek potwierdziła, że ludzki CD34. komórki były obecne tylko na obrzeżach guza GFP +, tuż poza obrębem guza GFP + (Figura 2C), nawet jeśli naczynia krwionośne CD31 + były obecne zarówno w guzie, jak i na obrzeżach guza (Figura 2C). Te badania pokazują, że CD34. komórki mają również zdolność do homeowania naczyń obwodowych guza. Integryna ypla jest eksprymowana przez komórki progenitorowe CD34 +. Aby określić, w jaki sposób krążące komórki progenitorowe i inne komórki zatrzymują się w obwodowym układzie naczyniowym guza, zbadaliśmy role cząsteczek adhezji komórkowej w tym procesie. Krążące komórki, takie jak limfocyty, wykorzystują selektyny do inicjowania kontaktu z naczyniem krwionośnym (toczenie) i integryny a4 lub a2 w celu zatrzymania na śródbłonku i wynaczynienia z krążenia (22, 23). Komórki prekursorowe hematopoetyczne również wykorzystują integrynę A 4 do przylegania do śródbłonka szpiku kostnego i do powrotu do szpiku kostnego z krążenia (24-26). Aby ocenić rolę specyficznych białek adhezyjnych w bazowaniu komórek progenitorowych, zbadaliśmy ekspresję integryn na krążących komórkach CD34 +. Komórki CD34 + wyizolowano do czystości 98% z ludzkich PBMC w 3 rundach chromatografii powinowactwa kulek magnetycznych anty-CD34. Komórki CD34 + wyrażały znaczące poziomy integryn <4 (100%),> 5 <1 (99%), a v <3 (99%) i <2 (68%), ale mało integryny a v <5 (figura 3A). . Podjednostka integryny a 4 może łączyć się z podjednostkami a1 lub a7, chociaż podjednostkę a7 wykryto tylko w małych podzbiorach komórek pochodzących z szpiku kostnego. Zaobserwowaliśmy, że populacja komórek CD34 + wyraża wysoki poziom podjednostki a integryny a 1, ale nie wyraża podjednostki integryny A7 (dodatkowa Figura 2). Zatem integryna a4a (VLA-4) jest pierwotną integryną a4 na komórkach progenitorowych CD34 +. Podobnie jak komórki CD34 +, CD34. komórki jednojądrzaste wyrażają także wysokie poziomy tych samych integryn (dodatkowa Figura 3). Podczas gdy komórki śródbłonka wyrażają wysokie poziomy integryny a5 (3, a v3 3 i av a 5, wyrażają one niskie poziomy integryny a4 <1, brak integryn y2 i brak CD133. Tak więc, ponieważ komórki CD34 + wykazują ekspresję CD133 i wysoki poziom integryli a4Pi i a2, ale nie zawierają avp3, komórki te wyraźnie nie pochodzą z śródbłonka (Figura 3A). Integryna a (3l pośredniczy w adhezji komórek progenitorowych do śródbłonka in vitro. Następnie określiliśmy, czy integryny na komórkach CD34 + pośredniczą w przyleganiu do śródbłonka naczyniowego poprzez wysiewanie komórek znakowanych fluorescencyjnie na spłaszczonych monowarstwach EC in vitro. Ludzkie komórki CD34 + wiążą się silnie z EC (Figura 3, B i C). Adhezja komórek CD34 + do śródbłonka została zablokowana przez przeciwciała przeciwko integrynie A4 (Figura 3, B i C) i A1 (dodatkowa Figura 2), jak również przez rekombinowany rozpuszczalny VCAM (rsVCAM), inny konkurencyjny inhibitor funkcji integryny. 4 , ale nie przez przeciwciała przeciwko innym integrynom (rysunek 3, B i C). Łącznie, badania te pokazują, że integryna a4.1 selektywnie pośredniczy w przyłączaniu komórek progenitorowych CD34 + do śródbłonka in vitro. Ponieważ integryna a4P1 jest receptorem do łączenia fibronektyny segmentu (CS-1), alternatywnie składanej formy komórkowej fibronektyny (27), a dla VCAM, cząsteczki nadrodziny immunoglobulin eksprymowanej na śródbłonku w tkankach objętych stanem zapalnym (22), badania te wskazują, że interakcje a-4-VCAM lub a-4-fibronektyny mogą sprzyjać adhezji komórek progenitorowych do śródbłonka. Rzeczywiście, proliferujące komórki śródbłonka eksprymują ligandy a4 p komórkową fibronektynę (27) i VCAM (Figura 3D). [patrz też: excedrin migrastop opinie, endoproteza stawu biodrowego a renta, skrecenie stawu skokowego ] [więcej w: excedrin migrastop opinie, test ciążowy quixx, skrecenie stawu skokowego ]