Mechanizm naprowadzania dla rekrutacji komórek progenitorowych szpiku kostnego do nowonaczyń ad

W ciągu kilku minut po iniekcji wewnątrznaczyniowej komórki CD34 + pochodzące z ludzkiego szpiku kostnego obserwowano w krążeniu wewnątrz układu naczyniowego guza. Około 10 minut po wstrzyknięciu obserwowano komórki fluorescencyjne podczas pierwszego walcowania, a następnie zatrzymywanie w naczyniach krwionośnych na obrzeżach guza (Figura 1D), ale nie w centrum guza (Figura 1D), sąsiadującej poduszce tłuszczowej piersi lub niezrewidowanej skórze (nie pokazano). ). Hodowanie komórek nie było zależne od gęstości naczyń krwionośnych w tkance guza, ponieważ obserwowano rozległe unaczynienie w centrum i na obrzeżu guza (Figura 1D). W ciągu 15 minut po iniekcji nie zaobserwowano dalszych komórek fluorescencyjnych zatrzymujących się w naczyniach krwionośnych. Zatrzymane komórki pozostały na obrzeżu guza podczas 30-minutowego początkowego okresu obserwacji. Od 5- do 10-krotnie więcej komórek zatrzymanych na obrzeżach guza niż w centrum guza lub w sąsiadującej poduszce tłuszczowej (rysunek 1E). Figura Ludzkie komórki progenitorowe CD34 + sąsiadują z obwodowym unaczynieniem nowotworu. (A) Nagim myszom z rakiem piersi GFP-N202 pod przezroczystą skórno-fałdową komorą wstrzyknięto znakowane komórki progenitorowe. (B) Mikroskopia wideo w czasie rzeczywistym: guzy GFP w przezroczystych komorach. Powiększenie, × 10. (C) Układ naczyniowy guza jest widoczny w przeźroczystych komorach. Powiększenie, × 100. (D) Dwa obrazy każdego z łożysk naczyniowych obwodowych i centralnych w 15 minut po wstrzyknięciu zwierzętom, którym wstrzyknięto komórki CD34 + wyznakowane CMTMR (strzałki). Powiększenie, × 200. Naczynia krwionośne są obserwowane jako ciemne kanały (strzałki). (E) Średnia liczba komórek CD34 + CMTMR w centrum guza, obwodzie guza i poduszce tłuszczowej na x 200 pól. SEM. * P <0,0019. (F) Pięć mikronowe kriosekcji tych samych guzów ze zwierząt, którym wstrzyknięto komórki CD34 + utrwalono w acetonie, następnie inkubowano ze szczurzym przeciw-mysim CD31 i kozimi anty-szczurzymi przeciwciałami FITC i sfotografowano. Powiększenie, × 200. Groty strzałek wskazują komórki CD34 +. Strzałki wskazują naczynia krwionośne CD31 +. Pasek skali: 50 .m. (G) Średnia liczba komórek CD34 + na x 200 mikroskopijnych pól w 5. M kriosekcji. ** P <0,015. (H) Kriosekcja F obserwowana przy powiększeniu x 630 wskazuje, że komórki CD34 + (strzałki) znajdują się przylegające do ściany naczynia krwionośnego lub w tkankach w pobliżu naczyń krwionośnych (groty strzałek). Rysunek 2: Ludzki CD34. komórki jednojądrzaste również są domem dla obwodowego układu naczyniowego guza. (A) Mikroskopia wewnątrzwitalna CD34 znakowanego CMTMR. komórki jednojądrzaste napotykające naczynia nowotworowe. Pokazano łożyska naczyniowe obwodowych i centralnych guzów, jak również sąsiadującą poduszkę tłuszczową po 20 minutach po wstrzyknięciu zwierzętom, którym wstrzyknięto CD34. Znakowany CMTMR. komórki jednojądrzaste (groty strzałek). Powiększenie, × 200. Pokazano także ośrodek i obwód guza 72 godziny po wstrzyknięciu komórek. (B) Średnia liczba CMTMR CD34. komórki w centrum guza, obwód guza i poduszka tłuszczowa na pole x 200. SEM po 15 minutach. * P <0,0009. (C) Sekcja guza po śmierci pokazuje CD34. komórki (czerwone, strzałki) na obrzeżach guza GFP + (zielone) (po lewej). Powiększenie, × 400. Pokazano również naczynia krwionośne CD31 + (czerwone) na obwodzie guza GFP + (zielone) (po prawej). Powiększenie, × 200. Figura 3Integrina a4Pi pośredniczy w przyleganiu ludzkich komórek CD34 + do śródbłonka. (A) Profile FAC dla integryn CD34, CD133 i a4A1, a5 (3, a v3, aVa i a2 na komórkach CD34 + i komórkach HUVEC. Profil FACS w zarysie przedstawia fluorescencję przeciwciała kontrolującego izotyp. Procent komórek dodatnich jest wskazywany przez liczbę w prawym rogu każdego profilu. hCD34 +, ludzki CD34 +. (B i C) przyleganie komórek CD34 + do monowarstw EC w obecności pożywki, anty-r4A1, A5a, aV3, a r5, lub a2 lub rsVCAM. (B) Średnia liczba komórek CD34 + przylegających do EC na 200 mikroskopowych pól. SEM. * P <0,002 (anty-4 (4 1) i P <0,005 (rsVCAM). (C) Czerwone fluorescencyjne komórki CD34 + przylegające do EC jak w B. cIgG wskazuje na kontrolną, dopasowaną izotypowo immunoglobulinę. (D) Profil FACs ekspresji VCAM na hodowlach HUVEC. (E) Średnia liczba komórek przylegających do rekombinowanych fragmentów fibronektyny CS-1 w obecności pożywki hodowlanej lub pożywki z antagonistami przeciwciała integryny a4 (1 (HP2 / 1) lub integryny a5 <1 (JBS5) na × 200 mikroskopów pole. SEM. Analiza pośmiertna cienkich odcinków guzów wyizolowanych po 60 minutach po wstrzyknięciu komórek potwierdziła, że komórki CD34 + zostały selektywnie zatrzymane na obrzeżach guza, a nie w środku guza (Figura 1, F i G; Suplementowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; 10.1172 / JCI24751DS1). Co istotne, zaobserwowano komórki CD34 + przylegające do ścian naczyń w świetle naczyń krwionośnych CD31 +, w obrębie ścian naczyń oraz w pobliżu naczyń w miąższu guza (rysunek 1H) [więcej w: najlepsze piosenki dla dzieci, jak długo gotować ciecierzycę, proste kroki taneczne ] [więcej w: relewium, ada obrazy, aromactiv plastry ]