GSK-3 jest centralnym regulatorem patologii związanych z wiekiem u myszy czesc 4

Reprezentatywna transmisyjna mikrografia elektronowa przedstawiająca rurowy agregat (strzałka) w myszy KO. Nie były one widoczne u myszy WT. Oryginalne powiększenie × 40000; pasek skali: .m. (C) Zwiększona produkcja ponadtlenku w mięśniu szkieletowym myszy KO. Senescence w innych narządach. Chociaż skupiliśmy się na mięśniach poprzecznie prążkowanych, chcieliśmy również ustalić, czy starzenie może wpływać na inne układy narządów u myszy KO. Dlatego zwróciliśmy się do układu pokarmowego i zbadaliśmy wątrobę i jelito cienkie. Co zaskakujące, biorąc pod uwagę to, co widzieliśmy w innych układach narządowych, delecja w wątrobie nie powodowała widocznych nieprawidłowości w barwieniu H & E (dane nie pokazane). Jednakże, gdy szukaliśmy markerów starzenia w wątrobie myszy KO, stwierdziliśmy wysoce znaczący wzrost w fosfo-histonowych komórkach H2AX-dodatnich, zgodny z przedwczesnym starzeniem się w hepatocytach KO (Figura 5A). Rycina 5 Okres życia w układzie trawiennym. (A) Starzenie w wątrobach (hepatocytach) myszy KO, jak określono za pomocą dodatniego wyniku fosfo-histonowego H2AX (jądra wybarwione brązem). Oryginalne powiększenie, × 200; pasek skali: 50 .m. (B) SA. -GAL, marker starzenia komórkowego, jest szeroko rozpowszechniony w jelicie cienkim myszy KO (uwaga na niebieskie obszary). Chociaż trudne do oszacowania, wydaje się, że krypta jest cienka, a kosmki są rzadkie u myszy KO, również zgodne ze starzeniem. Groty strzałek wskazują pojedyncze komórki SA-GAL-dodatnie. Oryginalne powiększenie, × 100 (górny rząd); × 400 (dolny rząd); podziałka: 200. m (górny rząd), 50. m (dolny rząd). W przypadku jelita cienkiego myszy KO stosowano marker starzenia komórkowego, aktywność związaną z senescencją a-galaktozydazy (SA-gal) i stwierdzono wyraźny wzrost aktywności u myszy KO, podczas gdy tylko sporadyczne SA-gal. a dodatnie pojedyncze komórki obserwowano u myszy WT (Figura 5B). Kość i układ kostny. Następnie zbadaliśmy układ kostny i stawy. Użyliśmy mikro-TK i histologicznych przekrojów barwionych H & E i błękitem Alcian (te ostatnie wykrywają proteoglikan) w celu zbadania stawu kolanowego pod kątem objawów związanych z wiekiem zapalenia kości i stawów. W wieku roku objętość kości / całkowita objętość (BV / TV) u myszy KO była podobna do tej u myszy WT (Figura 6A). Ponadto, stawy myszy WT i KO były porównywalne pod względem architektury, a kości i powierzchnie chrząstki stawowej były stosunkowo normalne (Figura 6A). Jednakże, w wieku 2 lat, BV / TV u myszy KO była zwiększona na podstawie analizy mikro-CT (Figura 6A). Ta różnica w objętości kości między myszami KO i WT wyraźnie widać na rekonstrukcji 3D stawu. Obrazy histologiczne potwierdzają, że powierzchnia stawowa jest pozbawiona chrząstki, a kostnienie podchrzęstnej kości rozszerzyło się na obszar łąkotki. Wspólna przestrzeń myszy KO, jak również otaczające tkanki podtrzymujące, są wyraźnie zmineralizowane, co powoduje prawie całkowite zesztywnienie. Figura 6 Zwiększona masa kostna, patologia stawu kolanowego i cytokiny zapalne u myszy GK3a KO. (A) Reprezentatywne skany mikro-CT (na niebiesko) i zdjęcia histologiczne kolana. BV / TV, analizowane przez mikro-CT, wzrosło uderzająco w kolanach myszy KO w wieku 12 i 24 miesięcy. Wartości wskazują BV / TV dla każdej grupy. Zwapnienia w starzejących się kolanach myszy KO są również widoczne zarówno w mikro-CT jak i histologii. W wieku 24 miesięcy występuje zespolenie przestrzeni stawowej i łąkotki stawu kolanowego. Oryginalne powiększenie, × 40. (B) Reprezentatywne obrazy immunohistochemiczne z kolan myszy WT lub GK3a KO, barwione pod kątem zapalnych cytokin MMP-13 i IL-1. Barwienie MMP-13 (brązowe zabarwienie) jest zwiększone w szpiku kostnym KO po 12 miesiącach i pozostaje podwyższone po 24 miesiącach. Barwienie IL-1 (brązowe zabarwienie) jest również zwiększone w osteocytach i szpiku kostnym myszy KO po 12 miesiącach, wskazując na podwyższone cytokiny zapalne u myszy KO. Oryginalne powiększenie, × 100. W celu zbadania poziomu ekspresji typowych mediatorów choroby zwyrodnieniowej stawów u tych zwierząt wykonano immunohistochemię, stosując przeciwciała przeciwko MMP-13 i IL-1 (Figura 6B). Dwunastomiesięczne myszy wykazywały podobne ilości MMP-13 w miejscu połączenia kości i kości u obu zwierząt WT i KO. Główną różnicą w barwieniu MMP-13 pomiędzy myszami WT i KO był wyższy poziom ekspresji przez komórki w szpiku kostnym myszy KO. Podobnie, barwienie IL-1 po roku było również zwiększone w szpiku kostnym, z dodatkowym wyraźnym barwieniem osteocytów u myszy KO w porównaniu z tym u myszy WT. Po 24 miesiącach barwienie IL-1 wydawało się podobne u myszy WT i KO, ale poziomy MMP-13 pozostawały znacząco zwiększone u myszy KO.
[hasła pokrewne: jak przygotować się do badania usg jamy brzusznej, jak długo gotować ciecierzycę, telefon zaufania darmowy ]
[patrz też: nużeniec ludzki objawy, isoprinosine cena, nyda opinie ]