Dominująco odziedziczył hiperinsulinizm wywołany mutacją receptora sulfonylomocznika typu 1 czesc 4

Roztwór pipetowy zawierał 140 mM KCl, 1,2 mM MgCl2, 2,6 mM CaCl2, 10 mM HEPES (pH 7,4 z KOH), a wewnętrzny roztwór (kąpielowy) zawierał 110 mM KCl, 2 mM MgCl2, mM CaCl2, 30 mM KOH, 10 mM EGTA, 10 mM HEPES (pH 7,2 z KOH) i nukleotydy jak wskazano. Roztwory zawierające ATP przygotowywano świeżo każdego dnia, a pH dostosowywano po dodaniu ATP. Diazoksyd wytworzono jako 200 x roztwór podstawowy w 0,1 M KOH, a tolbutamid jako 100 mM roztwór podstawowy w 0,15 M KOH. Szybka wymiana roztworów została osiągnięta poprzez umieszczenie łaty w ujściu jednej z szeregu sąsiednich rur dopływowych umieszczonych w kąpieli. Przewodność nachylenia mierzono, dopasowując prostą linię do zależności prąd-napięcie pomiędzy a20 a <100 mV: w każdym rozwiązaniu obliczono średnią z pięciu kolejnych ramp. Relacje dawka-odpowiedź ATP mierzono naprzemiennie roztworami testowymi i kontrolnymi. Przewodnictwo wyrażono jako ułamek średniej uzyskanej w roztworze kontrolnym przed i po zastosowaniu ATP. Krzywe dawka-odpowiedź ATP pasowały do równania Hilla: G / Gc = / (1 + ([ATP] / Ki) h), gdzie [ATP] to stężenie ATP, Kiis stężenie ATP, przy którym hamowanie jest w połowie maksymalne , a h to współczynnik nachylenia (współczynnik Hilla). Wszystkie dane są podane jako średnie. SEM. Symbole na rysunkach oznaczają średnią, a pionowe słupki wskazują SEM (gdzie jest większa niż symbol). Istotność statystyczną testowano za pomocą testu ucznia lub ANOVA, odpowiednio. Wyniki Wykrywanie mutacji E1506K. Analiza PCR-SSCP ujawniła nieprawidłową migrację fragmentów DNA w siedmiu z 38 próbek pacjentów w eksonie 37 SUR1 (Figura 1a). Sekwencjonowanie wariantu (przypadek 1) doprowadziło do wykrycia heterozygotycznej substytucji GAG AAG w kodonie 1506, powodując zmianę aminokwasu z kwasu glutaminowego do lizyny (E1506K) (Figura 1b). Ta mutacja znajduje się w drugim fałdzie wiążącym nukleotyd białka SUR1. Rysunek Demonstracja mutacji E1506K. (a) Analiza SSCP eksonu 37 SUR1. Wyniki przedstawiono dla dwóch osobników niosących mutację E1506K (Mt) i dwie kontrole (Wt). Nieprawidłowo migrujący fragment DNA zaznaczono strzałką. Żel przepuszczano przez 4 godziny w 38 ° C. (b) Analiza sekwencji ujawnia mutację G. A w sekwencji genomowej skutkującą substytucją kwasu glutaminowego dla lizyny. (c) Wykrywanie mutacji przez analizę restrykcyjną genomowego DNA amplifikowanego PCR. Mutacja E1506K powoduje zniknięcie miejsca restrykcyjnego MnlI, co prowadzi do utworzenia nowego produktu trawienia 89-bp dla zmutowanego allelu (strzałka). MW, marker masy cząsteczkowej; Mt, mutant; Wt, typ dziki. Obecność tej mutacji missense powoduje zanikanie miejsca endonukleazy restrykcyjnej MnlI i tworzenie nowego produktu 89, który zapewnia środki do potwierdzenia i sprawdzenia jego obecności (Figura 1c). We wszystkich siedmiu przypadkach osoby były heterozygotyczne pod względem mutacji, a mutacja została odziedziczona po matce. Nie wykryto żadnych innych mutacji w SUR1, Kir6.2, glukokinazy (GCK) lub eksonach 11 i 12 genów dehydrogenazy glutaminianowej (GLUD1) u któregokolwiek z tych osobników. Mutacja E1506K nie została znaleziona w 100 normalnych fińskich chromosomach. Zbadaliśmy również 160 chromosomów chorych na cukrzycę typu 2, a mutacja nie została wykryta w żadnej z nich. Analiza powiązań genetycznych. Sześciopokoleniowy rodowód z sześcioma pacjentami poddano analizie pod kątem powiązań genetycznych przy użyciu metod nieparametrycznych i parametrycznych. Najpierw przetestowaliśmy pod kątem istotności obserwacji, że haplotyp obejmujący rzadki polimorfizm pojedynczego nukleotydu, E1506K, był dziedziczony przez wszystkie dotknięte chorobą osobniki, ale przez żaden z tych osobników nieobjętych wcześniejszym pokoleniem. Obliczenia te nie zawierają żadnych założeń dotyczących sposobu dziedziczenia. Zakłada się, że wspólny haplotyp został wprowadzony do rodowodu tylko raz w którymkolwiek z czterech chromosomów posiadanych przez parę założycieli. Prawdopodobieństwo otrzymania obserwowanego wzoru podziału haplotypów przypadkowo wynosiło 1,2 × 10. 7, silnie wspierając hipotezę, że segregacja CHI w rodowodzie była zależna od segregacji haplotypu. Następnie wykonaliśmy analizę sprzężeń dwupunktowych z dominującymi i recesywnymi modelami dziedziczenia. Wszyscy, z wyjątkiem ostatniego pokolenia, byli uważani za osoby o nieznanym fenotypie, podczas gdy w ostatnim pokoleniu osobniki nie dotknięte chorobą i dotknięte chorobą były tak samo zaznaczone na rycinie 2. Powiązanie zmutowanego allelu z fenotypem obliczono przy użyciu modelu dominującego, który zakłada allel. częstotliwość 0,01, pełna penetracja i brak fenokopii
[więcej w: jak długo gotować ciecierzycę, jak przygotować się do badania usg jamy brzusznej, przeglądarka skierowań uzdrowiskowych ]
[podobne: chleb orkiszowy kalorie, sanostol tran, menostop ]