Dominująco odziedziczył hiperinsulinizm wywołany mutacją receptora sulfonylomocznika typu 1 cd

Średni promień jądra największych jąder komórek a na 1000 | jm cytoplazmy komórek . mierzono za pomocą półautomatycznego analizatora obrazu (Videoplan Kontron, Monachium, Niemcy), jak opisano poprzednio (21). Badania metabolizmu glukozy. Szczegółowe badania metabolizmu glukozy przeprowadzono na matkach w przypadkach i 4. Pierwszego dnia stopień tolerancji glukozy oceniano w 2-godzinnym doustnym teście tolerancji glukozy (OGTT) (75 g glukozy). Natychmiast po OGTT wykonano zacisk hiperglikemiczny w celu oceny maksymalnej insuliny stymulowanej glukozą i pojemności wydzielniczej peptydu C (22). Glukoza we krwi została ostro zwiększona do 20 mM przez stały wlew glukozy i zaciśnięta przy 20 mM przez godzinę poprzez infuzję 20% glukozy z różną szybkością, określaną przez pomiary stężenia glukozy we krwi wykonywane w 5-minutowych odstępach. W 150, 165 i 180 minutach pobrano próbki do pomiaru insuliny w osoczu i peptydu C. Średnie wartości próbek pobranych w 150, 165 i 180 minutach zostały wykorzystane do oceny zdolności wydzielania insuliny. Drugiego dnia określono zdolność do wydzielania insuliny w fazie pierwszej za pomocą dożylnego testu tolerancji glukozy (IVGTT). Po dwunastogodzinnym postu, wlewek glukozy (300 mg / kg w 50% roztworze) wlewano do żyły przedłokciowej w celu znacznego zwiększenia poziomu glukozy we krwi. Próbki insuliny z glukozy i osocza pobierano przy ~ 5, 0, 2, 4, 6, 8 i 10 minutach. Odpowiedź na insulinę oceniano na podstawie powierzchni pod krzywą, która została obliczona metodą trapezoidalną. Stopień insulinooporności oceniano za pomocą euglikemicznej techniki hiperinsulinemicznej. Po podaniu IVGTT wstrzykiwaną dawkę insuliny (Actrapid 100 jm / ml; Novo Nordisk, Gentofte, Dania) wlewano przez 10 minut, aby szybko podnieść insulinę w osoczu do pożądanego poziomu, przy czym była ona utrzymywana przez ciągły wlew insuliny w szybkość 120 mU / m2 powierzchni ciała na minutę. Poziom glukozy we krwi był zaciśnięty przy 5,0 mM przez następne 120 minut poprzez infuzję 20% glukozy w różnym tempie, zgodnie z pomiarami stężenia glukozy we krwi wykonywanymi w 5-minutowych odstępach. Dane obliczano dla każdego 20-minutowego okresu; średnia wartość dla okresu od 60 do 120 minut została wykorzystana do obliczenia wskaźników wychwytu glukozy w całym ciele (wartość M). Rekombinowane badania KATP-channel Konstrukcja CHI-SUR1. Mutagenezę ukierunkowaną szczurzej SUR1 (GenBank nr L40624) przeprowadzono przez subklonowanie odpowiednich fragmentów do wektora pALTER, a mutagenezę przeprowadzono zgodnie z protokołem MEGAGENEI SYSTEMÓW Promega Altered Sites II in vitro (Promega Corp., Madison, Wisconsin, USA). Syntezę zamkniętego mRNA przeprowadzono stosując zestaw do transkrypcji in vitro mMessage mMachine (Ambion, Austin, Texas, USA). Dziki typ lub zmutowany SUR1 był koeksprymowany z myszką Kir6.2 (GenBank D50581) (23, 24). Elektrofizjologia. Samice Xenopus laevis znieczulono MS222 (2 g / l dodano do wody). Jeden jajnik usunięto przez mini-laparotomię, nacięcie przyszyto i pozwolono zwierzęciu wyzdrowieć. Gdy rana całkowicie się zagoiła, drugi jajnik został usunięty podczas podobnej operacji, a zwierzę zostało następnie uśmiercone przez dekapitację podczas znieczulenia. Niedojrzałe stadium V. VI Xenopus oocytów ręcznie defolikulowano i oocyty wstrzykiwano wspólnie z około 0,1 ng Kir6.2 i około 2 ng SUR (typu dzikiego lub zmutowanego), co dawało stosunek 1:20. Ostateczna objętość wstrzyknięcia wynosiła około 50 nl / oocyt. Kontrolnym oocytom wstrzyknięto wodę. Wyizolowane oocyty utrzymywano w roztworze Barth a i badano 1. 4 dni po wstrzyknięciu (25). Dwuelektrodowe badania napięcia napięciowego. Prądy całych komórek rejestrowano z nienaruszonych komórek jajowych za pomocą dwuprzewodowego zacisku napięciowego (Geneclamp 500, Axon Instruments Inc., Foster City, Kalifornia, USA), filtrowano przy kHz i przetwarzano na postać cyfrową przy 4 kHz (25). Prądy całej komórki zostały zmierzone 280. 295 milisekund po rozpoczęciu impulsu napięcia. Oocyty stale perfundowano roztworem zawierającym 90 mM KCl, mM MgCl2, 1,8 mM CaCl2 i 5 mM HEPES (pH 7,4 za pomocą KOH). Hamowanie metaboliczne wytwarzano przez perfuzję za pomocą 3 mM Na-azydku. Badania wycinanych łatek. Pipety łuskowe zostały wyciągnięte z grubościennego szkła i miały rezystancję 250. 500 k. po napełnieniu roztworem pipety. Prądy makroskopowe rejestrowano z gigantycznych poprawek typu inside-out , stosując wzmacniacz patch-clamp EPC7 (List Electronik, Darmstadt, Niemcy) w temperaturze 20-24 ° C (25). Potencjał utrzymywania wynosił 0 mV, a prądy były wywoływane przez powtarzalne 3-sekundowe rampy napięciowe od ~ 110 do +100 mV. Prądy filtrowano przy 0,2 kHz, cyfryzowano przy 0,5 kHz za pomocą interfejsu Digidata 1200 i analizowano za pomocą oprogramowania pClamp (Axon Instruments Inc.)
[hasła pokrewne: przeglądarka skierowań uzdrowiskowych, najlepsze piosenki dla dzieci, studia ratownik medyczny ]
[więcej w: nyda opinie, palomed, zofia zborowska wikipedia ]